Хлорофилот е зелен пигмент кој се наоѓа во повисоките растенија и сите други фотосинтетички организми. Хлорофилот А и хлорофилот Б се растворливи во етанол, етер и ацетон и други растворувачи, нерастворливи во вода и нафтен етер, затоа, може да користат поларни растворувачи како што се ацетон, метанол, етанол, етил ацетат и така натаму за да се извлече хлорофил.
Процес на екстракција на хлорофил:
Екстракцијата на хлорофил се подготвува во полу-темна просторија на 25 степени C. Чекорите на екстракција се како што следува:
(1) Земете 1000 грама свежи зелени листови и здробете ги во Векслер.
(2) Скршените 1000 грама зелени листови ставете ги во ацетон со мала количина калциум карбонат (температура 20 степени) за екстракција, додека фрагментите од листот не станат безбојни по филтрирањето и чистењето.
(3) Ставете го филтрираниот екстракт од ацетон во инка која содржи 1 литар нафтен етер и 100 mL ацетон, а потоа нежно ротирајте, додека додавате дестилирана вода додека не се раслојува. Поголемиот дел од ацетонот и нечистотиите{4}}растворливи во вода во водениот слој се фрлаат, оставајќи само раствор од нафтен етер.
(4) Откако растворот на нафтениот етер повторно ќе се прочисти со дестилирана вода, се чисти повеќе од 5 пати со 200ml80% раствор на метанол кој содржи петролеум етер и 0,01g оксална киселина и на крајот се добива жолта-зелена суспензија.
(5) Суспензијата се суши со безводен натриум сулфат и се инфилтрира во колона направена од прашок од сахароза со дебелина од 3 см. Потоа исчистете ги таложените пигменти за да ги отстраните каротеноидите и да направите да содржат само природен хлорофил.
(6) Сахарозата колона која содржи природен хлорофил е поделена на два слоја, зелениот слој има 4-10mm хлорофил Б слој, другиот син слој е 2-6mm хлорофил А слој.
(7) Делот што се наоѓа во средината на синиот слој (околу половина од синиот слој) се става во етер, суспензијата се филтрира и се екстрахира, се чисти со дестилирана вода, се суши со натриум сулфат и се филтрира со прибор за да се добие хлорофил А.
(8) Отстранете го средниот дел од зелениот слој во (6) и брзо ставете го во етерот за филтрирање и перење за да направите раствор на хлорофил Б етер.
Како да се одвои за време на екстракција?
Хроматографијата е важен метод за сепарација, прочистување и идентификација на органските соединенија, особено во микроанализата е широко користен. Пигментите во овошјето и зеленчукот главно вклучуваат-каротин растворлив во масти, лутеин, хлорофил и вода-растворливи антоцијани. Во експериментите со екстракција, можеме да го искористиме принципот на слична мешаливост на вода-растворливи антоцијанински филтрирање, што за возврат може да користи тенко-слојна хроматографија, колона хроматографија, течна хроматографија со високи перформанси (HPLC) до раздвојување на бета-каротен и слабеење на дуелорофте. типови на пигмент за возврат, може соодветно да се избере еден органски растворувач или различен сооднос на мешан растворувач како средство за проширување и средство за елуирање, оптималните услови за сепарација беа утврдени.
